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    12-Jun-2018

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941ISSN 0326-2383PALABRAS CLAVE: Antiinflamatorio, Apiaceae, Hydrocotyle bonariensis.KEY WORDS: Antiinflammatory activity, Apiaceae, Hydrocotyle bonariensis.* Autor a quien dirigir la correspondencia. E-mail: gferraro@ffyb.uba.arLatin American Journal of Pharmacy(formerly Acta Farmacutica Bonaerense)Lat. Am. J. Pharm. 28 (6): 941-4 (2009)Short CommunicationReceived: July 23, 2009Accepted: August 12, 2009Actividad Antiinflamatoria Tpica de Extractosde Hydrocotyle bonariensis Lam. (Apiaceae)Adriana OUVIA 1, Susana GORZALCZANY 2, Cristina ACEVEDO 2 & Graciela FERRARO 1*1 Ctedra de Farmacognosia IQUIMEFA (UBA-CONICET),2 Ctedra de Farmacologa. Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires.Junn 956,2 piso, (C 1113 AAD) Buenos Aires, Argentina.RESUMEN. Hydrocotyle bonariensis Lam. (Apiaceae), redondita de agua, paragita o tembladeri-lla, es una especie sudamericana empleada en medicina popular principalmente contra eritemas cutne-os. Los resultados obtenidos indican que tanto la infusin como el extracto metanlico de las partes areasinhiben significativamente el edema de oreja en ratn (inflamacin local), con valores entre el 30 y 58%,respectivamente, validando su uso popular. No se observaron efectos antiinflamatorios por va oral.SUMMARY. Topic antiinflammatory activity of extracts from Hydrocotyle bonariensis Lam. (Apiaceae). Hy-drocotyle bonariensis Lam. (Apiaceae), (redondita de agua, paragita or tembladerilla, is a South Ameri-can species employed in popular medicine against cutaneous eritemas. The results indicate that both the infusionand the methanol extract of aerial parts significantly inhibited mouse ear edema (local swelling), with values be-tween 30 and 58% respectively, confirming the popular use ot this species. No significant anti-inflammatory ef-fects were observed by oral administration. INTRODUCCIONHydrocotyle bonariensis Lam. (Apiaceae), esuna planta herbcea comnmente conocida co-mo redondita de agua, paragita o tembla-derilla, de amplia distribucin en Sudamrica.En la Repblica Argentina es muy frecuente en-contrarla en praderas hmedas, pajonales y m-danos del este y sur de la provincia de BuenosAires. Vegeta durante todo el ao y florece enverano 1,2. Desde hace muchos aos se empleaen medicina popular en Amrica del Sur, princi-palmente contra eritemas cutneos. Las hojasmaceradas en alcohol son utilizadas externa-mente en forma de cataplasmas para curar heri-das inflamadas y otras inflamaciones de la piel.Adems las infusiones preparadas con las hojas,sumidades floridas y tallos se utilizan y se le ad-judican propiedades diurticas, estimulantes,emenagogas y antispticas 3-5. Hydrocotyle asitica (sin.: Centella asiatica),conocida como centella, es una planta exticaoriginaria de zonas subtropicales de la India,distribuida en las costas del ocano ndico hastaMadagascar e Indonesia. Crece espontneamen-te en lugares hmedos, orillas de lagunas, zonaspantanosas y regiones propias de climas tropica-les y subtropicales y fue empleada desde hace3000 aos por la medicina tradicional hind ypor los indgenas africanos en el tratamiento dela lepra. Posteriormente la medicina ayurvdicadifundi sus propiedades desde la India a todoel mundo, indicando su accin dermatolgica ycomo revitalizador psico-fsico. Tambin tieneamplio uso tpico a nivel mundial en patologasdermatolgicas como cicatrizacin de heridas yescaras, prevencin de estras del embarazo ypsoriasis, lceras drmicas, bucales o corneales,blefaritis, conjuntivitis y quemaduras 6. 942OUVIA A., GORZALCZANY S., ACEVEDO C. & FERRARO G.Dado el uso popular y la cercana taxonmi-ca entre ambas especies se encar el estudio fi-toqumico-farmacolgico de H. bonariensis. Enla presente investigacin se evala la accinantiinflamatoria local y sistmica de los extractosacuoso (EA) y metanlico (EM). MATERIALES Y METODOSMaterial vegetal y preparacin de losextractosSe utilizaron las partes areas en flor de H.bonariensis que fueron recogidas en abril de2006 en Punta Lara, provincia de Buenos Aires,Argentina. La recoleccin y clasificacin del ma-terial vegetal fue realizada por el Dr. G. Giberti,del Museo de Farmacobotnica de la Facultadde Farmacia y Bioqumica de la Universidad deBuenos Aires (Leg G.C. Giberti 652 ,BAF).InfusinA 10 g de material vegetal seco y pulveriza-do se le agreg 100 ml de agua hirviendo. Sedej en reposo durante 20 min. Se filtr y luegose liofiliz el extracto (rendimiento: 1,28 g). Extracto diclorometnico Cincuenta gramos de material vegetal seco ypulverizado se macer con 300 ml de dicloro-metano a temperatura ambiente durante 24 h. Elextracto se filtr y se volvi a extraer el marcoen iguales condiciones. Los filtrados fueron reu-nidos y llevados a sequedad en evaporador ro-tatorio (rendimiento: 6.8 g). Extracto metanlico El marco de la extraccin con diclorometanose macer con 300 ml de metanol durante 24 ha temperatura ambiente, se filtr y se repiti laoperacin. Los extractos metanlicos fueronreunidos y llevados a sequedad a presin redu-cida (rendimiento: 4,5 g).El extracto obtenido fue cromatografiado enTLC de celulosa microcristalina utilizando comofase mvil AcH 25%. Animales Para el estudio de la actividad antiinflamato-ria se utilizaron ratones Swiss machos, con unpeso entre 23-30 g y ratas Sprague-Dawley hem-bras con un peso entre 180-200 g. Los animalesse mantuvieron con dieta comercial y agua adlibitum, se colocaron en un ambiente climatiza-do de 22 1 C y se mantuvieron con ciclos de12 h de luz y oscuridad. Todas las experienciasfueron seguidas de acuerdo a normas ticas pa-ra el uso y cuidado de animales 7. Actividad antiinflamatoriaEdema auricular inducido por TPA Se evalu la actividad antiinflamatoria tpicade la infusin y del extracto metanlico de H.bonariensis utilizando el test del edema de orejaen ratn inducido por 12-o-tetradecanoilforbol-13 acetato (TPA), descripto por Carlson et al. 8.Se utilizaron grupos de 10 animales cada uno.La oreja derecha de cada ratn recibi una apli-cacin tpica de 2,5 g de TPA a una concen-tracin de 0.125 g/l en acetona, 10?l en cadalado de la oreja. La izquierda, utilizada comocontrol, recibi el vehculo. Inmediatamentedespus de la aplicacin de TPA, se administr1 mg/oreja de la infusin o 1 y 10 mg/oreja delextracto metanlico, disueltos en etanol:agua(80:20), respectivamente. Se utiliz indometaci-na (0,5 mg/oreja/20 l) como droga de referen-cia. Despus de 4 h de la administracin deTPA, los animales se sacrificaron y se extrajeronde cada oreja discos de 5 mm de dimetro paradeterminar su peso. La diferencia de peso entrela oreja derecha e izquierda se tom como ex-presin del edema y se calcul el porcentaje deinhibicin del edema en los animales tratadoscon respecto al grupo control.Test del edema de pata en rata inducido por ca-rragenina Se utilizaron grupos de 6 animales. El edemase indujo inyectando 0.1 ml de carragenina al1% en solucin fisiolgica en la almohadillaplantar de la pata trasera derecha 9. El extractometanlico de H. bonariensis se disolvi enEtOH-Tween80-H2O (5:5:90) y se administr adosis de 100 y 300 mg/kg i.p.y 300 mg/kg vaoral 30 y 60 min antes de la inyeccin de carra-genina, respectivamente. Como droga de refe-rencia se utiliz indometacina (10 mg/kg); elgrupo control slo recibi vehculo (5 ml/kg).La inflamacin se cuantific midiendo el volu-men de las patas utilizando un pletismmetro(Ugo Basile) a las 0, 1, 3, 4 y 5 h despus de lainyeccin de carragenina. La diferencia entre elvolumen de la pata izquierda y el de la derechaes indicativa del grado de inflamacin. Anlisis estadistico Los resultados fueron evaluados estadstica-mente por anlisis de varianza de una va. Seutiliz el test de Dunnett para determinar las di-ferencias entre los valores de las medias. Un va-lor de p < 0.05 se consider estadsticamentesignificativo. Todos los datos se expresaron co-mo media ESM.943Latin American Journal of Pharmacy - 28 (6) - 2009RESULTADOS Y DISCUSINEn la cromatografa realizada sobre el extrac-to metanlico se observaron bandas mayorita-rias correspondientes a 6 flavonoides. Se estudi el efecto antiinflamatorio de losextractos acuoso y metanlico de H. bonariensisutilizando dos modelos de inflamacin agudadependientes de diferentes mediadores proinfla-matorios. En el caso de la inflamacin en patade rata inducida por carragenina se encuentraninvolucrados, en su etapa inicial de la primerahora, histamina y serotonina y a las 4-5 h la res-puesta est condicionada principalmente porprostaglandina E2 y leucotrieno B4, por lo quelos compuestos que inhiban su sntesis o sus re-ceptores inhibiran su efecto 10. El edema de oreja inducido por TPA es unmodelo de inflamacin local o tpica que per-mite evaluar sustancias con actividad antiinfla-matoria y tambin agentes antipsoriasis. El TPAinduce la respuesta inflamatoria mediante la ac-tivacin de la proteinquinasa C y la consecuenteestimulacin de la fosfolipasa A2, hidrlisis delcido araquidnico y biosntesis de prostaglan-dinas y leucotrienos; en trabajos recientes 11 seha demostrado que el factor de necrosis tumoral(TNF-) tambin participa en el desarrollo dedicha respuesta floggena. Adems de la induccin de la produccin deeicosanoides, se ha demostrado que el TPA in-duce tambin la expresin de citoquinas: inter-leuquina-1 , factor de necrosis tumoral (TNF-), quimiotaxina, factor estimulante de granulo-citos/macrfagos, interleuquina 6, en queratino-citos 12. Se sabe que los queratinocitos epidr-micos participan en reacciones inmunolgicas einflamatorias a travs de la produccin de cito-quinas. Entre stas, el TNF- ha demostrado te-ner un rol crucial en desrdenes inmunolgicosy de inflamacin en piel y el incremento de susniveles se correlaciona con la severidad de laTratamiento Peso de oreja (mg) % de inhibicinControl 18.49 0.89 Infusin 12.88 0.77 ** 30.34Extracto metanlico 1 mg 10.30 1.51 ** 43.00Extracto metanlico 10 mg 7.59 0.98 ** 58.00Indometacina 0.5 mg 4.2 0.82 ** 77.28Tabla 1. Test del edema de oreja en ratn inducido por 12-o-tetradecanoilforbol-13 acetato (TPA) de la infusiny del extracto metanlico de H. bonariensis. Los valores se expresan como media ESM; **p < 0.01 (Test deDunett).enfermedad en pacientes con psoriasis 13 mien-tras que el bloqueo de su funcin se traduce enuna mejora de la misma 14.Los resultados obtenidos indican que tanto lainfusin como el extracto metanlico inhibensignificativamente el edema de oreja en ratn,con valores entre el 30 y 58%, siendo el extractometanlico el ms activo observndose una re-lacin dosis/efecto (Tabla 1). En contraste conlos resultados obtenidos en este modelo, la ad-ministracin parenteral u oral del extracto meta-nlico a las dosis utilizadas, no modific la res-puesta inflamatoria en el modelo de inflamacinpor carragenina (Tabla 2). Esta diferencia decomportamiento podra deberse al diferente me-canismo de accin de los agentes flogsticos,TPA y carragenina, o al hecho de que la ruta deadministracin sistmica no llega a alcanzar unaconcentracin adecuada en el sitio de inflama-cin. Por otra parte, en modelo de edema indu-cido por TPA la respuesta observada se debe alefecto local del extracto evitando en gran medi-da fenmenos de metabolismo y excrecin delos componentes. En base a los resultados obtenidos se de-muestra que los extractos acuoso y metanlicode H. bonariensis poseen efecto antiinflamatoriotpico, que no ha sido reportado previamentepara esta especie, hecho que avalara su uso tra-dicional. Futuros estudios fitoqumicos y farma-colgicos ya en marcha nos permitirn identifi-car los principios activos responsables del efec-to. Agradecimientos. Los autores agradecen al Ing. G.Giberti por la recoleccin y determinacin taxonmi-ca del material vegetal y a la Secretara de Ciencia yTcnica de la Universidad de Buenos Aires por elapoyo econmico otorgado para el desarrollo delpresente trabajo.944OUVIA A., GORZALCZANY S., ACEVEDO C. & FERRARO G.REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS1. Cabrera, A.L. (1965) Flora de la Provincia deBuenos Aires. Parte IV. 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Efecto antiinflamatorio del extracto metanlico de H. bonariensis. Test del edema de pata de rata indu-cido por carragenina. Cada grupo representa la media SEM (n=6); ** p < 0.01 comparado con el control (Testde Dunnett).7. Olfert, E.D., B.M. Cross & A.A Mc William(1993) Canadian Council of animal careguide to the care and use of experimental ani-mals, vol 1. 2nd ed.8. Carlson, RP, L. ONeill-Davis, J. Chang & A.J.Lewis (1985) Agents Actions 17: 197-2049. Winter, C.A., E.A. Risley & G.W. Nuss (1962)Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. 111: 554-7.10. Nishizuka, Y. (1988) Nature 334: 661-5.11. Murokawa, M., K. Yamaoka, Y. Tanaka & Y.Fukuda (2006) J. Etnopharmacol. 71: 1331-6.12. Wilmer, J.L., F.G. Burleson, F. Kayama, J. Kan-no, M.L. Luister (1994) J. Invest. Dermatol. 102:915-2213. Bonifati, C., M. Carducci, P. Cordiali Fei, E.Trento, G. Sacerdori, M. Fazio & F. Ameglio(1994) Clin. Exp. Dermatol. 19: 383-7. 14. Papp, K.A. (2004) Expert Opin. Pharmacother.5: 2139-46.